蛋白免疫印跡（western blot，即WB），想必做蛋白相關實驗的小伙伴們都很熟悉，這里就不班門弄斧啦，但是做起實驗并沒那么容易。每當我們準備好樣本，滿懷希望自己可以做出這樣的實驗結果時↓

結果卻只能得到這樣↓

還有這樣，目的條帶傻傻分不清↓

甚至是這樣的↓

面對這些殘忍的現實時，我們該怎么抉擇？重復一次？換個蛋白？換個抗體？顯然這些方案都不是更佳的方案。

為了避免出現以上問題，小編就給大家梳理一下western blot中常見問題以及對應的解決方案。

1條帶形狀不好看怎么回事？

小編覺得可能的原因有：

? 凝膠的不均勻或聚合不好，應對策略---灌膠前將溶液充分混勻。

? 樣本鹽濃度較高，應對策略---樣本進行除鹽或者將樣本鹽濃度調成一致。

? 緩沖液多次使用，導致成分發生變化，應對策略---重新配制。

? 凝膠下部有氣泡，應對策略---電泳前先趕走氣泡。
? 電泳時溫度過高，應對策略---降低電流或電壓。

2沒有條帶是怎么回事？

小編覺得可能的原因有：

? 二抗的HRP活性太強，將底物消耗光，應對策略---降低二抗的濃度。

? ECL底物中H2O2不穩定，失活，應對策略---更換ECL。

? ECL底物沒有覆蓋到相應的位置，應對策略---重新洗膜之后再次曝光。

? 一抗使用不當或者二抗失效，應對策略---在有效期內使用抗體，并對應來源。

3背景高咋回事呢？

小編也總結了以下可能原因：

? 洗膜不充分，應對策略---建議增加洗液體積和洗滌次數。

? 封閉不徹底，應對策略---提高封閉液的濃度，孵育時間，保證封閉液完全浸沒轉印膜。

? 封閉物使用不當，比如檢測生物素標記的蛋白時不可以用脫脂奶粉，應對策略---針對不同的蛋白使用不同的封閉物。

? 抗體非特異性結合，應對策略---可以降低抗體的濃度或者減少孵育的時間。