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2024-08-08作者:熒光激發光源事業部時間:2019-11-24 10:39:12瀏覽22484 次
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,簡稱GFP),是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質,從藍光到紫外線都能使其激發,發出綠色螢光。在細胞生物學與分子生物學中,綠色螢光蛋白(GFP)基因常用做報告基因(reporter gene)。綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動物(例如:兔子)上進行表現,并拿來映證某種假設的實驗方法。通過基因工程技術,綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組,在后代中持續表達。現在,綠色螢光蛋白(GFP)基因已被導入并表達在許多物種,包括細菌,酵母和其他真菌,魚(例如斑馬魚),植物,蒼蠅,甚至人等哺乳動物的細胞。
GFP的作用是什么?
綠色熒光蛋白(GFP)已被廣泛用于標記蛋白和研究活細胞中細胞過程的動態變化。
為什么GFP發出綠色熒光?
將綠色熒光蛋白這種光轉換成綠色的光,這是我們實際看到的時候水母亮起。純化的GFP溶液在典型的室內光線下看起來是黃色的,但是當在戶外陽光下拍攝時,它們會發出明亮的綠色。
在哪里找到GFP?
Osamu Shimomura首先從海mo Aequorea victoria中分離出GFP,該水母隨洋流漂流到北美洲西海岸。
如何檢測GFP?
轉染后24-72小時,可通過熒光顯微鏡,熒光激活細胞分選(FACS)分析或熒光計測定來檢測GFP表達,具體取決于所用宿主細胞系。有一份已發表的報道稱穩定的哺乳動物細胞表達GFP(48)。
GFP如何用于研究中?
生物學家利用GFP來學習期間發育過程中的胚胎和胎兒的細胞。生物學家使用GFP作為標記蛋白。...如果細胞產生綠色熒光,科學家推斷該細胞也表達靶基因。此外,科學家使用GFP標記特定的細胞器,細胞,組織。
GFP如何在醫學中使用?
GFP應用程序。在生物化學和細胞生物學中,研究和開發最深入的蛋白質是綠色熒光蛋白(GFP),該蛋白來自水母維多利亞水母(Aequorea victoria)。...這種熒光標記物可以進行多色標記,并用于研究蛋白質之間的相互作用。
GFP和EGFP有什么區別?
GFP和EGFP的區別。GFP和EGFP之間的主要區別是GFP(代表綠色熒光蛋白)是一種蛋白質,當暴露于藍光時會顯示出明亮的綠色熒光,而EGFP(代表增強型綠色熒光蛋白)則比GFP表現出更強的熒光。
GFP是報告基因嗎?
然而,它一般不被接受的是,GFP也可以被用作一種定量報道的基因的表達。我們報告說,GFP是通過流式細胞儀測量熒光時單個真核細胞中基因表達的可靠報告者。
為什么將GFP用作標記?
的GFP基因被廣泛用作標記,因為它的非常有用的性質,例如高的穩定性,最小的毒性,非侵入性的檢測,并產生綠色光不加入外部的輔因子和不昂貴的設備的應用程序的能力的。
GFP如何用于基因發現?
綠色熒光蛋白(GFP)是使Aequorea victoria的水母蛋白以發光。該蛋白質由單個基因編碼。...如果GFP基因正確插入,它可以在水母以外的生物中表達。的GFP基因可被用來作為用于其它的表達的視覺標簽基因。
GFP在什么波長發出熒光?
的GFP從A.維多利亞具有在一個主要的激發峰波長為395納米和在475nm處較小一個。其發射峰是在509納米,這是在可見光的下部綠色部分光譜。GFP的熒光量子產率(QY)為 0.79。
GFP的大小是多少?
GFP是由238個氨基酸組成的蛋白質,分子量為27 kDa,呈圓柱狀,長度為4.2 nm,直徑為2.4 nm。六肽生色團的化學結構已經闡明
GFP對細胞有毒嗎?
關于GFP是否對細胞有毒性有矛盾的結果。首先,熒光蛋白的聚集會導致細胞毒性。第二,長時間激活GFP可能會產生對細胞有毒的自由基。
如何從水母中提取GFP?
下村(Shimomura)于1960年代首先從水母中提取了發光蛋白,然后分離了帶有指示信息的基因。……只要動物具有該基因,它就可以產生GFP-可用于照亮動物的特定部位,例如肌肉細胞或腦細胞回路。
為什么科學家會在水母中尋找熒光基因?
究其原因只有一個部分的水母的細胞煥發了到做與如何每種電池使用的基因,它有。發光的細胞打開了在水母 DNA中自然發現的綠色熒光蛋白(GFP)基因。不發光的細胞使該基因保持關閉狀態。
為什么GFP如此值得注意?
為什么GFP如此值得注意?的GFP基因是來自水母Aequorea victoria的,GFP使在紫外光下水母發熒光。...對該質粒進行了基因修飾,以攜帶gfp和抗藥性基因。抗生素抗性基因使直接選擇轉化細胞成為可能。
為什么水母具有GFP?
GFP對水母圖片中經常出現的發光不負責任-“熒光”實際上是由于拍攝果凍時使用的閃光燈的反射所致。在維多利亞水母中,一種稱為水母發光蛋白的蛋白質在與鈣結合后會釋放藍光。
GFP有多少個BP?
GFP是由238個氨基酸組成的蛋白質,分子量為27 kDa,呈圓柱狀,長度為4.2 nm,直徑為2.4 nm。六肽生色團的化學結構已經闡明.
GFP是否二聚化?
嚴格地說,EGFP / GFP具有非共價二聚化的真正不平凡的傾向。這意味著與GFP或另一種熒光蛋白(FP)融合的POI 可能在細胞中形成二聚體。
GFP可溶嗎?
維多利亞水母(Aequorea victoria)的綠色熒光蛋白(GFP)已迅速成為許多生物系統中的標準報道基因。通過定點誘變,我們產生了一種更可溶的密碼子修飾的GFP,稱為可溶修飾的GFP(smGFP)。
熒光標簽如何工作?
通常,熒光標記或標記使用稱為熒光團的熒光分子的反應性衍生物。……最常見的標記分子是抗體,蛋白質,氨基酸和肽,它們隨后被用作檢測特定目標的特異性探針。
什么是GFP融合蛋白?
GFP(綠色熒光蛋白)融合蛋白已用于解決單個細胞以及特定生物體組織中的各種問題。GFP融合蛋白可以瞬時或穩定表達。
什么是增強的綠色熒光蛋白?
的增強型綠色熒光蛋白允許在哺乳動物細胞中的基因轉移的靈敏的檢測。... 來自水母維多利亞水母的綠色熒光蛋白(GFP)已成為基因表達的重要標志。
GFP對光敏感嗎?
維多利亞多管水母,在20世紀60年代用于研究生物發光水母,能夠發射的那些生物體的一個光。其生物發光是由于存在水母發光蛋白(對鈣敏感)和綠色熒光蛋白(GFP,一種熒光蛋白)。
GFP中的熒光團是什么?
GFP熒光團的形成。……主要的熒光團(通常稱為發色團)是由序列中65-67位的絲氨酸,酪氨酸和甘氨酸殘基組成的三肽。盡管這種簡單的氨基酸基序通常在整個自然界中都可以找到,但通常不會導致熒光。
什么是GFP質粒?
pGLO 質粒是一種工程化的質粒,在生物技術中用作創建遺傳修飾生物的載體。該質粒包含幾個報告基因,最的是綠色熒光蛋白(GFP)和氨芐青霉素抗性基因。GFP是從海elAequorea victoria分離得到的。
GFP蛋白的預測分子量是多少?
使用GFP時,一級結構為239個氨基酸,總分子量為26,870道爾頓,或26.9 kD。
我應該購買哪些供應商的GFP抗體?
GFP抗體的使用方法是決定供應商的一個重要因素。供應商列出抗體最合適的使用方法,并且給出建議的稀釋度。然而,抗體性能可能與系統和實驗條件有關。許多供應商提供客戶支持服務,這可以就他們公司抗體是否適合您的實驗來給出建議。
GFP抗體也是別GFP變體嗎?
GFP抗體識別維多利亞多管發光水母(Aequorea victoria)GFP蛋白的其它變體。
為什么免疫印跡實驗中GFP抗體無信號?
免疫印跡實驗中的信號缺失可能存在多種問題。轉膜失敗和轉膜效率極差都導致無信號。轉膜效率可以通過麗春-S染色進行檢測。氣泡的存在也會導致轉膜效率差。GFP標記蛋白的表達水平可能太低,提高上樣體積,并包含陽性對照。抗體濃度非常稀也可能是個問題,多試幾個不同濃度的抗體來檢測免疫印跡。此外,一個極小的可能性是,GFP標簽沒有同步表達和不表達也可導致信號缺失。
GFP信號太弱無法成像,是否可以增強信號?
在某些實驗條件下,GFP熒光會部分或完全丟失。因此,表達GFP標記蛋白的一些細胞結構可能難以顯現或成像。GFP-Booster是駱駝來源的VHH結構域結合蛋白耦合了強信號熒光染料,能穩定并增強熒光信號。
綠色熒光蛋白(GFP)是來自維多利亞多管發光水母 Aequorea victoria的一個小分子量蛋白質。它是由Osamu Shimomura發現的,當被藍色到紫外區的光刺激時發出綠色熒光。相關熒光蛋白在許多其它海洋生物中發現,例如珊瑚,海葵和海紫羅蘭。GFP非常適合用于蛋白質標記,這是它取得空前成功的更大原因之一。雖然它非常適合實時成像,但是在使用方法中如果導致GFP熒光淬滅,那么就有必要使用抗GFP抗體。組織樣品,組織學制劑和使用固定劑的冷凍保存,通常導致GFP熒光完全或部分損失,則需要使用GFP抗體來獲得可靠的實驗結果。通過免疫印跡檢測GFP標簽蛋白,免疫沉淀檢測蛋白質-蛋白質相互作用,這些實驗也必須使用GFP抗體。GFP抗體有多克隆或單克隆抗體,適用于蛋白質印跡,免疫沉淀,免疫組化,免疫細胞化學定位和免疫吸附測定(ELISA),以檢測GFP,GFP變體和GFP融合蛋白。
GFP抗體使用量在增長,相應供應商的數量也在增加,有些供應商還提供GFP單結構域抗體或納米抗體。這些抗體包括一個單一可變抗體結構域,這是一種駱駝來源的單結構域抗體。這些抗體比常規抗體小得多,而且有重要的用途。 Caussinus E等人已經率先發明deGradFP方法,該方法利用遺傳編碼方式,具體為在任何真核系統中,快速消耗GFP標簽蛋白。此系統依賴于GFP單結構域抗體片段(vhhGFP4)融合到F-box結構域。此融合蛋白結合GFP并直接介導蛋白酶體降解。當GFP標記的蛋白是功能蛋白的來源,那么基因功能的分析就不受殘留蛋白的干擾。Ries等人使用GFP標簽蛋白和分子量小、親和力高的單結構域GFP抗體,在微管,神經元和酵母細胞研究中獲得納米級的分辨率。