綠色熒光蛋白（GFP）的基因序列有多大 ？

最開始是 238 個氨基酸的肽鏈，約 25KDa。然后按一定規則，11 條β-折疊在外周圍成圓柱狀的柵欄；圓柱中，α-螺旋把發色團固定在正幾乎中心處。發色圖被圍在中心，能避免偶極化的水分子、順磁化的氧分子或者順反異構作用與發色團，致使熒光猝滅。

什么是綠色熒光蛋白 ？

綠色熒光蛋白分子的形狀呈圓柱形，就像一個桶，負責發光的基團位于桶中央，因此，綠色熒光蛋白可形象地比喻成一個裝有色素的“油漆桶”。裝在“桶”中的發光基團對藍色光照特別敏感。當它受到藍光照射時，會吸收藍光的部分能量，然后發射出綠色的熒光。利用這一性質，生物學家們可以用綠色熒光蛋白來標記幾乎任何生物分子或細胞，然后在藍光照射下進行顯微鏡觀察。原本黑暗或透明的視場馬上變得星光點點——那是被標記了的活動目標。對生物活體樣本的實時觀察，在綠色熒光蛋白被發現和應用以前，是根本不可想象的。而這種徹底改變了生物學研究的蛋白質，最初是從一種廣泛生活于太平洋海域的發光水母體內分離得到的。

綠色熒光蛋白在細胞生物學中有哪些應用 ？

綠色熒光蛋的發光機理比熒光素/熒光素酶要簡單得多。一種熒光素酶只能與相對應的一種熒光素合作來發光，而綠色熒光蛋白并不需要與其他物質合作，只需要用藍光照射，就能自己發光。在生物學研究中，科學家們常常利用這種能自己發光的熒光分子來作為生物體的標記。將這種熒光分子通過化學方法掛在其他不可見的分子上，原來不可見的部分就變得可見了。生物學家一直利用這種標記方法，把原本透明的細胞或細胞器從黑暗的顯微鏡視場中“揪出來”。傳統的熒光分子在發光的同時，會產生具有毒性的氧自由基，導致被觀察的細胞死亡，這叫做“光毒性”，因此，在綠色熒光蛋白發現以前，科學家們只能通過熒光標記來研究死亡細胞靜態結構，而綠色熒光蛋白的光毒性非常弱，非常適合用于標記活細胞。有了這些熒光蛋白，科學家們就好像在細胞內裝上了“攝像頭”，得以實時監測各種病毒“為非作歹”的過程。通過沙爾菲的基因克隆思路，科學家們還培育出了熒光老鼠和熒光豬，由于沙爾菲與錢永健的突出貢獻，他們與綠色熒光蛋白的發現者下村修共享了2008年的諾貝爾化學獎。

綠色熒光蛋白標記技術有什么意義？

美籍華人錢永健系統地研究了綠色熒光蛋白的工作原理，并對它進行了大刀闊斧的化學改造，不但大大增強了它的發光效率，還發展出了紅色、藍色、黃色熒光蛋白，使得熒光蛋白真正成為了一個琳瑯滿目的工具箱，供生物學家們選用。目前生物實驗室普遍使用的熒光蛋白，大部分是錢永健改造的變種。有了這些熒光蛋白，科學家們就好像在細胞內裝上了“攝像頭”，得以實時監測各種病毒“為非作歹”的過程。通過沙爾菲的基因克隆思路，科學家們還培育出了熒光老鼠和熒光豬，由于沙爾菲與錢永健的突出貢獻，他們與綠色熒光蛋白的發現者下村修共享了今年的諾貝爾化學獎。

熒光素酶報告基因與綠色熒光蛋白（GFP）有什么區別 ？

1.兩者的結果檢測方法不同.GFP綠色熒光蛋白,很直觀,能夠直接檢到熒光,在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到,對細胞的生命活動和其他并行的實驗安排影響很小.熒光素酶報告基因使用起來比GFP多一個步驟,因為熒光素酶是個酶,不發熒光,發熒光的是它的底物,熒光素.熒光素在細胞里（要說螢火蟲細胞我就不知道了哦）是沒有的.所以檢測熒光素酶的通常步驟是裂解細胞,釋放熒光素酶,與熒光素及其他所需化學物質混合,才得到熒光.現在雖然也有活細胞內檢測熒光素酶的手段,但要將熒光素送入活細胞,本身就已要對細胞進行相當的干擾.所以一般來說熒光素酶實驗的同一批細胞不適合再做其他并行實驗.
2.兩者的結果含義不同.GFP如果說是定量檢測表達蛋白的話,這個定量只能夠指,表達的細胞是多少個,不表達的細胞是多少個.GFP對于單個細胞來說,就有陽性和陰性兩種結果罷了.GFP不能夠定量地告訴你,這個/群細胞里的表達量是多高還是多低.熒光素酶就能夠定量地得到表達量/表達水平的數值,但這個數值是相對于一群細胞來說,而不是對于單個細胞.所以熒光素酶常常用來研究啟動子的功能與調控,因為啟動子對基因表達的調控可以是漸變的,而不是簡單的開和關兩種狀態.

熒光蛋白能夠發光的原因？

從水母體內發現的ＧＦＰ是由２３８個氨基酸構成，第６５、６６、６７位氨基酸（ＳｅｒＴｙｒＧｌｙ）形成發光團，經共價鍵連接而形成對羥苯甲基咪唑烷酮，可被光激發產生熒光［３－４］。許多科學家利用熒光蛋白的發光機理，將水母中熒光蛋白基因提取出來，轉入其他生物體內，使得生物變幻的多姿多彩。　一般的熒光染料標記的微生物，由于其生長快、分裂多，染料可在短時間內被稀釋，所以不能實時準確地觀察微生物侵入活體動物以及細胞的過程。近年發現，熒光蛋白可用于示蹤流行性病毒對活體細胞的感染，流行性病毒可被實時監控，借助于這一新技術，我們可以更深入地研究其感染方式。Ｚｈａｏ等發現用ＧＦＰ標記細菌，可以詳細地對細菌的入侵進行時空檢測，以確定細菌特異性的感染部位以及傳染源的空間位移。ＧＦＰ克服了一般熒光染料所帶有的缺陷，ＧＦＰ必將會進一步地取代一般的熒光染料，有效地幫助學術研究者觀察分析細菌、病毒的感染方式。

綠色熒光蛋白（EGFP）由熒光顯微鏡藍光激發，紅色熒光蛋白monomeric red fluorescent protein (mRFP)是什么光激發的？
紅色熒光蛋白monomeric red fluorescent protein (mRFP)是用530nm綠光激發。

熒光顯微鏡最常用的激發有哪幾種？
紫外激發藍色熒光 如DAPI染料，藍光激發綠色熒光 如FITC染料，綠光激發紅色熒光 如羅丹明染料。

fitc綠色熒光的激發波長是多少 ？
熒光素FITC的激發波長為495nm，發射波長為519nm，一般選用波長為488nm的激光器來激發這種熒光素，FITC分子量為389.4，吸收光波長為490～495nm，發射光波長為520～530nm