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GFP綠色熒光蛋白的性能和GFP用于分子標記

作者:生命科學事業部時間:2019-12-08 23:23:22瀏覽3933 次

信息摘要:

利用綠色熒光蛋白獨特的發光機制,可將GFP作為蛋白質標簽(protein tagging),即利用DNA重組技術,將目的基因與GFP基因構成融合基因,轉染合適的細胞進行表達,然后借助熒光顯微鏡便可對標記的蛋白質進行細胞內活體觀察。由于GFP相對較小,只有238個氨基酸,將其與其他蛋白融合后不影響自身的發光功能,利用GFP的這一特性已經加深了我們對細胞內一些過程的了解,如細胞分裂、染色體復制和分裂,發育和信號轉導等。

GFPgreen fluorescent protein的簡寫。是由下村修等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。GFP其基因所產生的蛋白質,在藍色波長范圍的光線激發下,會發出綠色熒光。

GFP熒光蛋白的性能:

GFP熒光極其穩定,在激發光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素(fluorescein)強,特別在450~490nm藍光波長下更穩定。GFP需要在氧化狀態下產生熒光,強還原劑能使GFP轉變為非熒光形式,但一旦重新暴露在空氣或氧氣中,GFP熒光便立即得到恢復。而一些弱還原劑并不影響GFP熒光。

中度氧化劑對GFP熒光影響也不大,如生物材料的固定、脫水劑戊二酸或甲醛等。GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此更適用于定量測定與分析。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白。由于GFP熒光是生物細胞的自主功能,熒光的產生不需要任何外源反應底物,因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。

GFP綠色熒光蛋白用于分子標記

作為一種新型的報告基因,GFP已在生物學的許多研究領域得到應用。利用綠色熒光蛋白獨特的發光機制,可將GFP作為蛋白質標簽(protein tagging),即利用DNA重組技術,將目的基因與GFP基因構成融合基因,轉染合適的細胞進行表達,然后借助熒光顯微鏡便可對標記的蛋白質進行細胞內活體觀察。由于GFP相對較小,只有238個氨基酸,將其與其他蛋白融合后不影響自身的發光功能,利用GFP的這一特性已經加深了我們對細胞內一些過程的了解,如細胞分裂、染色體復制和分裂,發育和信號轉導等。

1996年,Ehrdardt等人報道了利用GFP的特性研究細胞分化蛋白FtsZ的定位。研究顯示FtsZ在細胞分裂位點形成了一個環狀物,且至少有9種蛋白在細胞分裂中起重要作用,盡管對這些蛋白功能仍然不是很清楚,但是利用GFP融合蛋白已經搞清楚了它們聚合的順序以及在蛋白定位中的一些特征。利用GFP來檢測目標蛋白的定位已為我們提供了一種對細胞內的一些基本的生理過程進行更詳盡觀察的新方法。

GFP結構

GFP觀察常見問題:

1.動物植物里面表達GFP如何觀察和拍照?

首先要選擇光線比較暗的環境,佩戴路陽LUV-90P觀察眼罩,采用美國路陽熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3260RB照射要觀察的植株,GFP表達位置即可清晰呈現。

2.觀察到的GFP表達位置如何拍照?

要拍照植物GFP表達的位置,首先要有一臺單反相機,安裝美國路陽LUV-520植物拍照濾鏡,美國路陽LUV-520濾鏡是62mm,如果您的單反相機鏡頭不是62mm,可在市場上購買濾鏡安裝轉換卡,也可直接找美國路陽中國服務中心免費索取,用LUYOR-3260RB熒光蛋白觀察鏡照射植物,用裝有LUV-520濾鏡的單反相機直接拍照就行了,切記要關閉照相機閃光功能。

3.紅色熒光蛋白如何觀察和拍照?

首先要選擇光線比較暗的環境,佩戴路陽LUV-50觀察眼罩,采用美國路陽便攜式熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3260GR照射要觀察的植株,GFP表達位置即可清晰呈現。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位?

4. 用LUYOR-3260RB便攜式熒光蛋白觀察鏡需要把植物葉片采下來觀察嗎?

LUYOR-3260RB便攜式熒光蛋白觀察鏡內置有充電電池,即開即用,可以直接帶入到試驗田里面觀察, 無需采摘葉片,如果試驗田光線太亮,需要做隔光處理。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位?

5. LUV-520拍照濾鏡可以用于其他廠家的激發光源嗎?

凡是能激發GFP熒光的熒光蛋白觀察鏡, LUV-520拍照濾鏡均能夠滿足,可以單獨購買LUV-520拍照濾鏡。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位?

6.  365nm、450nm、488nm 用哪個波段更好?

GFP和egfp用這幾個波段都能激發出熒光,365nm激發的比較弱,488nm激發的熒光最強,但488nm的激發波長太接近發射波長520nm,激發光和發射光距離太近對觀察眼鏡要求太高,觀察眼鏡很難把發射光隔離掉,會嚴重干擾發射的熒光。所以用450nm的激發光是最理想的。

7.  365nm的紫外光源照射植物葉片為什么是紅色和黃色?

365nm的紫外光源照射植物葉片,葉片的葉綠素在紫外線作用下會發紅光,GFP發出的是綠色的熒光,紅色和綠色混在一起,會變成黃色,所有,用紫外光源照射葉片上黃色部位有可能就是GFP表達的位置。

8.  為什么觀察眼鏡和拍照濾鏡價格這么貴?

因為這種眼鏡和濾鏡的鏡片對波段的截止要求特別高,不允有任何激發光通過,鏡片表面經過了60多層涂層處理,制造工藝特別復雜。

9.  觀察眼鏡和拍照濾鏡如何保養?

觀察眼鏡和拍照濾鏡的鏡片經過了60多層涂層處理,不用時請放置好,表面有灰塵請用柔軟的鏡頭布蘸中性洗滌劑擦洗.

10. LUYOR-3260RB熒光蛋白觀察鏡主要有哪些應用?

1.檢測轉綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白DsRed)基因植物:水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥等;
2.檢測轉GFP、DsRed基因動物:小鼠、兔子、猴子等;
3.檢測轉GFP、DsRed基因微生物:細菌、真菌、酵母等;
4.檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達

11.在哪里可以買到美國路陽的便攜式熒光蛋白觀察鏡?

美國路陽在上海設立有中國客戶服務中心,提供路陽產品的銷售維修服務。上海、北京、鄭州均可免費上門演示,美國路陽對中國地區的客戶提供3年免費維修服務,中國地區免費咨詢電話:4006-254-365

 


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