您想觀察和拍照出下面的GFP表達的照片嗎？

如果您的文獻也希望有這樣的照片，請聯絡我公司銷售客服，我們提供GFP激發光源和拍照濾鏡。如果需要觀察WTGFP和GFPuv激發出來的熒光，可以佩戴LUV-10A或LUV-30A觀察眼鏡，如果要觀察EGFP的熒光，必須佩戴LUV-30A觀察眼鏡。如果您是增強型濾色熒光蛋白，請您閱讀《EGFP的激發光波長》。

GFP的激發光波長和GFP的發射光波長因GFP的種類不一樣，會有差別。

GFP綠色熒光蛋白在分子和細胞生物學中的應用越來越多。由于應用的多樣性，已經開發出形成原始野生型綠色熒光蛋白（wtGFP）的幾種變體。這些變體中的幾個具有與wtGFP不同的激發和發射光譜。

wtGFP綠色熒光蛋白最常用的突變可分為三類：

（1）紅移變體；
（2）像變體一樣的野生型；
（3）藍色發射變體。

如圖1所示，以EGFP為代表的紅移變體具有一個集中在約488 nm處的單個激發峰，發射峰波長為509 nm。類似野生型的變體的主要激發峰位于395 nm，發射峰位于509 nm，而發出藍色的突變體通常在380 nm附近有一個激發峰，在460 nm附近有一個發射峰（圖1）。

表1.GFP變體的激發和發射數據

綠色熒光蛋白

綠色熒光蛋白GFP的發現

綠色熒光蛋白(GreenFluorescent Protein，簡稱GFP）是在美國西北海岸所盛產的一種名為Aequorea victoria的水母中發現的一種可以發出綠色熒光的蛋白質。GFP最早是在1962年由日本科學家下村修發現，是由238氨基酸組成的單體蛋白質，蛋白分子量約為27kD。GFP的晶體結構顯示，蛋白質中央是一個圓柱形水桶樣結構，長420nm，寬240nm，由11個圍繞中心α螺旋的反平行β折疊組成，桶的頂部由3個短的垂直片段覆蓋，底部由一個短的垂直片段覆蓋，對熒光活性很重要的生色團則位于桶的大空腔內。實驗表明GFP熒光產生的前提是桶狀結構完整性，去除N端6個氨基酸或C端9個氨基酸，GFP均會失去熒光。原因是GFP生色團的形成效率較低，而且形成過程受外界環境影響較大。

綠色熒光蛋白GFP的應用

• 綠色熒光蛋白GFP在分子生物學上的應用

• 綠色熒光蛋白GFP作為報告基因

• 綠色熒光蛋白GFP作為融合標簽

• 作為生物傳感器

• 檢測pH

• 檢測鹵素離子

• 綠色熒光蛋白GFP在細胞生物學上的應用

• 綠色熒光蛋白GFP用于細胞的篩選

• 綠色熒光蛋白GFP用于藥物的篩選

綠色熒光蛋白GFP的發光原理

GFP的第65至67位的三個氨基酸（絲氨酸-酪氨酸-甘氨酸）殘基，可自發地形成一種熒光發色團。當蛋白質鏈折疊時，這段被深埋在蛋白質內部的氨基酸片段，得以“親密接觸”，導致經環化形成咪唑酮，并發生脫水反應。在分子氧存在的條件下，發色團可進一步發生氧化脫氫，最終成熟，形成可發射熒光的形式。具體過程為：在 O2存在下，GFP分子內第67位甘氨酸的酰胺對第65位絲氨酸的羧基進行親核攻擊，形成第5位碳原子咪唑基；第66位酪氨酸的α2β鍵脫氫反應之后，導致芳香團與咪唑基結合，并最終自發催化形成對羥基苯甲酸咪唑環酮生色。

GFP需要在氧化狀態下產生熒光，強還原劑能使GFP轉變為非熒光形式，但一旦重新暴露在空氣或氧氣中，GFP熒光便立即得到恢復。一般來說弱還原劑并不會影響GFP熒光，中度氧化劑如生物材料的固定，脫水劑戊二酸或甲醛等對GFP熒光影響也不大。

綠色熒光蛋白GFP的發光特性

GFP吸收的光譜更大峰值為395nm（紫外），并有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；發射光譜更大峰值為509nm（綠光），并帶有峰值為540nm的側峰（Shouder）。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發光對細胞的傷害更小，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）。此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似，兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強，特別是在450～490nm藍光波長下更穩定。類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此更適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。

綠色熒光蛋白序列信息

相關GFP的變體

在GFP發現的半個世紀中，陸續衍生了多個變體，其中最的要屬其紅移變體——增強型綠色熒光蛋白（enhanced GFP，EGFP；EGFP的更大吸收峰位于488nm）。其他還包括發射熒光也發生改變的變體，包括藍色熒光蛋白：EBFP，EBFP2，Azurite，mKalama；青色熒光蛋白：ECFP，Cerulean，CyPet；黃色熒光蛋白：YFP，Citrine，Venus，YPet等等。