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GFP熒光蛋白標記的質粒載體激發光和發射光

作者:生命科學事業部時間:2019-11-15 10:32:40瀏覽21598 次

信息摘要:

綠色熒光蛋白(GFP)是一種通用的生物標記,可用于監測生理過程,可視化蛋白質定位并檢測體內轉基因表達  。GFP可以被488 nm激光線激發,并在510 nm處被更佳檢測到。Green Fluorescent Protein (GFP) is a versatile biological marker for monitoring physiological processes, visualizing protein localization, and detecting transgenic expression in vivo. GFP can be excited by the 488 nm laser line and is optimally detected at 510 nm.

綠色熒光蛋白GFP)是一種通用的生物標記,可用于監測生理過程,可視化蛋白質定位并檢測體內轉基因表達  。GFP可以被488 nm激光線激發,并在510 nm處被更佳檢測到。Green Fluorescent Protein (GFP) is a versatile biological marker for monitoring physiological processes, visualizing protein localization, and detecting transgenic expression in vivo. GFP can be excited by the 488 nm laser line and is optimally detected at 510 nm.

EGFP is a basic (constitutively fluorescent) green fluorescent protein published in 1996, derived from Aequorea victoria. It is reported to be a rapidly-maturing weak dimer with moderate acid sensitivity.


為什么GFP發出綠色熒光?
綠色熒光蛋白這種光轉換成綠色的光,這是我們實際看到的時候水母亮起。純化的GFP溶液在典型的室內光線下看起來是黃色的,但是當在戶外陽光下拍攝時,它們會發出明亮的綠色。
GFP的作用是什么?
綠色熒光蛋白(GFP)已被廣泛用于標記蛋白和研究活細胞中細胞過程的動態變化。
在哪里找到GFP?
Osamu Shimomura首先從海mo Aequorea victoria中分離出GFP,該水母隨洋流漂流到北美洲西海岸。
GFP如何發出熒光?
綠色熒光蛋白(GFP)是水母維多利亞水母(Aequorea Victoria)中的一種蛋白,當暴露在光線下時會顯示綠色熒光。……在水母中,GFP與另一種稱為水母發光蛋白的蛋白質相互作用,當加入鈣時會發出藍光。
如何檢測GFP?
轉染后24-72小時,可通過熒光顯微鏡,熒光激活細胞分選(FACS)分析或熒光計測定來檢測GFP表達,具體取決于所用宿主細胞系。有一份已發表的報道稱穩定的哺乳動物細胞表達GFP。

GFP如何用于基因發現
綠色熒光蛋白(GFP)是使Aequorea victoria的水母蛋白以發光。該蛋白質由單個基因編碼。...如果GFP基因正確插入,它可以在水母以外的生物中表達。的GFP基因可被用來作為用于其它的表達的視覺標簽基因。
GFP是報告基因嗎?
GFP也可以被用作一種定量報道的基因的表達。我們報告說,GFP是通過流式細胞儀測量熒光時單個真核細胞中基因表達的可靠報告者。

GFP和EGFP有什么區別?
GFP和EGFP的區別。GFP和EGFP之間的主要區別是GFP(代表綠色熒光蛋白)是一種蛋白質,當暴露于藍光時會顯示出明亮的綠色熒光,而EGFP(代表增強型綠色熒光蛋白)則比GFP表現出更強的熒光。
GFP的大小是多少?
GFP是由238個氨基酸組成的蛋白質,分子量為27 kDa,呈圓柱狀,長度為4.2 nm,直徑為2.4 nm。六肽生色團的化學結構已經闡明。

GFP是疏水的還是親水的?
GFP是可溶的,但包含數段疏水氨基酸。在高鹽緩沖液的存在下,蛋白質的三維結構發生變化,從而使蛋白質的疏水區域暴露出來,而親水區域被屏蔽。
GFP有毒嗎?
關于GFP是否對細胞有毒性,存在矛盾的結果。首先,熒光蛋白的聚集會導致細胞毒性。其次,長時間激活GFP可能會產生對細胞有毒的自由基。
什么是GFP質粒?
pGLO 質粒是一種工程化的質粒,在生物技術中用作創建遺傳修飾生物的載體。該質粒包含幾個報告基因,最的是綠色熒光蛋白(GFP)和氨芐青霉素抗性基因。GFP是從海elAequorea victoria分離得到的。

紅色熒光蛋白如何工作?
紅色熒光蛋白(RFP)是一種通用的生物標記,可用于監測生理過程,可視化蛋白質定位并檢測體內轉基因表達。RFP可以被488 nm或532 nm激光線激發,并在588 nm處被更佳檢測到。
什么是藍色熒光蛋白
TagBFP(科學名稱mTagBFP)是一種通過TagRFP的位點特異性和隨機誘變產生的單體藍色熒光蛋白 [Subach等。2008]。TagBFP具有明亮的藍色熒光,更大激發/發射波長為402和457 nm,具有高光穩定性和極高的pH穩定性。
什么是tdTomato
tdTomato是一種非常亮的紅色熒光蛋白,比EGFP亮6倍。tdTomato的發射波長(581 nm)和亮度使其非常適合活體動物成像研究。所述tdTomato熒光蛋白是作為耐光如mCherry的。

GFP熒光蛋白的激發光和發射光光譜圖:

GFP熒光蛋白的激發光和發射光光譜圖

 

常用GFP熒光蛋白的激發波長和發射波長: 

GFP類別GFP Variant激發波長Excitation(nm)發射波長Emission max (nm)
wtGFP395509
GFPuV395509
Stemmer395509
EGFP488509
GFP-S65T489509
Y66H382459
EBFP380460

EGFP質粒圖譜:

egfp.png


GFP-LC3質粒圖譜

GFP-LC3質粒圖譜


img115.jpg


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